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人淋巴細(xì)胞因子Elisa試劑盒廠家,蘇州寧波

全國各地現(xiàn)貨供應(yīng)：人淋巴細(xì)胞因子Elisa試劑盒廠家,蘇州寧波

保存：2-8℃主要用途：科研檢測種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。

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人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒

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人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒 Human lymphocyte factor ELISA Kit

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人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒 Human lymphocyte factor ELISA Kit

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍然保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，所以可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。

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人萊姆IgG定量檢測/Lyme-IgG ELISA試劑盒	Human Lyme IgG ELISA Kit
人淋巴細(xì)胞抗原6復(fù)合物基因座A定量檢測/Ly6a ELISA試劑盒	human lymphocyte antigen 6 complex locus A,Ly6a ELISA Kit
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人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原2定量檢測/LFA-2/CD2 ELISA試劑盒	Human lymphocyte function associated antigen 2,LFA-2 ELISA Kit
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人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒

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人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒產(chǎn)品信息：

英文名稱：Human lymphocyte factor ELISA Kit

產(chǎn)品貨號：SBJ-H0389

品牌：森貝伽

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T

保存：2-8℃,避光保存

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨供應(yīng)

有效期：六個月

注：僅用于科研,不得用于臨床診斷

人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法：

1）血清－－－－-操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2）血漿－－－－-EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細(xì)胞上清液－－-1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4）組織勻漿－－－－-將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存－－－－－－如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒操作注意事項：

1.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

2.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。3.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

4.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。5.洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

6.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。7.加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

8.按照試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

9.底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒其他熱銷產(chǎn)品：

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人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒科研

產(chǎn)品資料

【產(chǎn)品名稱】：人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒供應(yīng)

【英文名稱】：Human lymphocyte factor elisa Kit

【檢測種屬】：大鼠等動植物。

【產(chǎn)品用途】：被測樣品定性或定量分析

【產(chǎn)品規(guī)格】：48T

【檢測方法】：酶免法/酶聯(lián)免疫法(ELISA)

【保存條件】：2-8℃

【供貨期】：1-3天(現(xiàn)貨供應(yīng))

【產(chǎn)品性狀】：液體盒裝

【服務(wù)優(yōu)勢】：全程提供ELISA實驗技術(shù)指導(dǎo)和elisa試劑盒免費代測

【樣本儲存】：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時，-20℃可保存1個月。-70℃可保存6個月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒供應(yīng)洗滌方法:

1. 自動洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時。

3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時，即可終止)。

7.每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。本公司專業(yè)經(jīng)銷人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒供應(yīng)長期為全國科研機(jī)構(gòu)、高校和科研人員提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，在保證產(chǎn)品質(zhì)量的同時，我們還配有扎實的售后技術(shù)咨詢和服務(wù)，歡迎來電咨詢。

該公司產(chǎn)品分類： IGA抗體 IgG抗體鼠抗兔抗二抗一抗抗體細(xì)胞新西蘭新生牛血清血清臨床檢驗培養(yǎng)基菌種保存可樣品運輸培養(yǎng)基軍團(tuán)菌檢驗培養(yǎng)基歐洲藥典培養(yǎng)基（EP標(biāo)準(zhǔn)） 2010版中國藥典培養(yǎng)基化妝品檢驗檢驗培養(yǎng)基飲用天然礦泉水檢驗培養(yǎng)基商業(yè)無菌檢驗培養(yǎng)基產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗培養(yǎng)基一次性衛(wèi)生用品檢驗檢驗培養(yǎng)基

人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒

人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒上海撫生專門提供各種ELISA試劑盒，各種標(biāo)本、種屬、具體指標(biāo)齊全。規(guī)格：48孔/96孔保存：2-8°方法：elisa貨期：現(xiàn)貨人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒 ELISA試劑盒所需要樣本處理及要求:1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）去除顆粒。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。上海撫生公司推薦相關(guān)類別產(chǎn)品信息：人乙型肝炎病毒前S2抗原（HBV preS2Ag）ELISA試劑盒人庚型肝炎病毒IgM（HGV-IgM）ELISA試劑盒人輸血傳播病毒/辛型肝炎病毒（（TTV）ELISA試劑盒人戊型肝炎病毒IgM（HEV-IgM）ELISA試劑盒人戊型肝炎病毒IgG（HEV-IgG）ELISA試劑盒人丁型肝炎IgM（HDV IgM）ELISA試劑盒人丁型肝炎IgG（HDV IgG）ELISA試劑盒人丙型肝炎IgM（HCV-IgM）ELISA試劑盒人丙型肝炎IgG（HCV-IgG）ELISA試劑盒人糖蛋白130（gp130）ELISA試劑盒人促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（CRF）ELISA試劑盒人去氨加壓素/1-去氨基-8-右旋-精氨酸加壓素（dDAVP）ELISA試劑盒人毒蕈堿型乙酰膽堿受體亞型M3（M-AChR M3）ELISA試劑盒人睪酮受體（TR）ELISA試劑盒人毒蕈堿型乙酰膽堿受體（M-AChR）ELISA試劑盒人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒注意：本產(chǎn)品只供科研使用，不用于臨床診斷，詳情請來電咨詢。

該公司產(chǎn)品分類：凝血酶原時間試劑凝血酶原時間試劑兔試劑盒雞試劑盒豬試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品/對照品標(biāo)準(zhǔn)品其他動植物elisa試劑盒大鼠elisa試劑盒小鼠ELISA試劑盒人ELISA試劑盒 elisa試劑盒碳水化合物類氨基酸類進(jìn)口生化試劑類國產(chǎn)試劑科研生物化學(xué)試劑藥品，生物制品檢驗培養(yǎng)基生物細(xì)胞，真菌培養(yǎng)菌

人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒

人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒

注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。

計算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，

在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD

值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋

倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值

代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋

倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值為0.92 以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%

檢測范圍：

3pg/ml -100pg/ml

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月

人B細(xì)胞生長因子（BCGF）ELISA試劑盒

人B細(xì)胞分化因子（BCDF）ELISA試劑盒

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人可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2（VEGFR-2/sFLK-1）ELISA試劑盒

人胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（TSLP）ELISA試劑盒

人穿孔素/成孔蛋白（PF/PFP）ELISA試劑盒

人多效生長因子（PTN）ELISA試劑盒

人可溶性CD28（sCD28）ELISA試劑盒

人淋巴細(xì)胞因子ELISA試劑盒

人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子（TARC/CCL17）ELISA試劑盒

人神經(jīng)細(xì)胞粘附分子配體1（NCAM-L1/CD171）ELISA試劑盒

人神經(jīng)保護(hù)因子（CVNPF）ELISA試劑盒

人可溶性腫瘤壞死因子α受體（sTNFαR）ELISA試劑盒

人可溶性細(xì)胞因子受體（sCKR）ELISA試劑盒

人可溶性凋亡相關(guān)因子配體（sFASL）ELISA試劑盒

人細(xì)胞凋亡抑制因子（IAP）ELISA試劑盒

人集落刺激因子（CSF）ELISA試劑盒

人γ干擾素誘導(dǎo)單核細(xì)胞因子（MIGF/CXCL9）ELISA試劑盒

人干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞趨化因子（ITAC/CXCL11）ELISA試劑盒

人CD14分子（CDl4）ELISA試劑盒

該公司產(chǎn)品分類：其他水產(chǎn)病毒病害檢測系列魚類水產(chǎn)病毒病害檢測系列蝦類水產(chǎn)病毒病害檢測系列水產(chǎn)病害類試劑盒其它致病菌檢測系列食源性致病菌檢測系列致病微生物系列試劑盒小宗農(nóng)產(chǎn)品檢測系列（PE）轉(zhuǎn)基因水稻檢測系列（PD）轉(zhuǎn)基因大豆檢測系列（PC）轉(zhuǎn)基因玉米檢測系列（PB）初篩系列（PA）轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品試劑盒公共衛(wèi)生檢疫試劑盒傳染病類診斷制劑禽病類檢測試劑盒豬病類檢測試劑盒 LEWIS大鼠 129/Se小鼠 F344大鼠

人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒

產(chǎn)品名稱：人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒

產(chǎn)品用途：科研實驗

公司服務(wù)：免費代測

產(chǎn)品規(guī)格：48T

人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒測定在臨床檢驗中的應(yīng)用由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測標(biāo)本中相應(yīng)的抗原，因此免疫測定的應(yīng)用范圍極廣，在臨床檢驗中可用于測定：

(1）體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。

(2）激素，包括小分子量的甾體激素等。

(3）抗生素和藥物。

(4）病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。

(5）另外，也可利用純化的抗原檢測標(biāo)本中的抗體，例如抗-HBs等。

人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒實驗過程中加樣可能碰到的問題:

1.過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)；

2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間；

3.加完標(biāo)本再加酶試劑時酶濺出孔外。.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。

相應(yīng)解決辦法：

1.標(biāo)本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

2.加樣后及時放入孵箱。

3.加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。

4.如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

5.標(biāo)本較多時，請分批操作。

人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒其他相關(guān)產(chǎn)品：

F2570-A	人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TAFA/CCL17)elisa試劑盒
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F2573-B	人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子elisa試劑盒
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該公司產(chǎn)品分類：配件及耗材其他生化試劑緩沖劑類表面活性劑實驗室常規(guī)設(shè)備分析儀器冷凍干燥機(jī) 鋁液測氫儀分離材料及耗材維生素類氬氣凈化器平移振蕩消解器色素類碳水化合物類石墨消解器微波類儀器植物激素及核酸類抗生素類微波消解儀制冷水循環(huán)器

人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒說明書

產(chǎn)品介紹

人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒參數(shù)：

編號	中文名稱	英文名稱	規(guī)格
F2569-A	人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒	Human lymphocyte factor elisa Kit	48T

一：人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒產(chǎn)品參數(shù)

編號	中文名稱	英文名稱	規(guī)格
F2569-A	人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒	Human lymphocyte factor elisa Kit	48T

二：人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒操作方法

人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中，我們來介紹一下更簡便的操作說明，編號：F2569-A，英文名稱Human lymphocyte factor elisa Kit

1、人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒操作方法一用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

（1）.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。（2）.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。（3）.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。（4）.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。（5）.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。（6）.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

2、人淋巴細(xì)胞因子elisa試劑盒操作方法二：用于檢測未知抗體的間接法：（1）.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。（2）.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）（3）.于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,最后一遍用DDW洗滌。（4）.于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘（5）.于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml （6）.可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 ELISA是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實驗診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結(jié)果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗又可以用于少量標(biāo)本的檢測，既可以做定性試驗也可以做定量分析等優(yōu)點，已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。

3、臨床標(biāo)本的收集和保存用于ELISA測定的臨床標(biāo)本最為常用的是血清（漿），有時因為特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集，要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值出現(xiàn)：生長激素、促黃體激素（LH）和促卵泡激素（FSH）均以陣發(fā)性方式釋放，因此，在測定此類激素時，有必要在密切相連的時間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其中間值為測定值。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r，血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測，應(yīng)根據(jù)藥代動力學(xué)選擇服藥后的最適時間抽血檢測。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測的血清標(biāo)本的收集則沒有時間和體位方面的影響，只是在處理和保存方面要考慮。

（1）要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。（2）樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。（3）血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應(yīng)在-70℃以下。（4）冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。（5）標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。

4、試劑準(zhǔn)備在臨床實驗室，對試劑準(zhǔn)備一般不太注意，通常的做法是，在實驗時將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時間不夠的問題，其直接的后果是對一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備最為關(guān)鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外，當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時，則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時配制。

三、加血清樣本及反應(yīng)試劑

在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，血清樣本的加入幾乎是唯一的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象，這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附，從而引起非特異顯色。所以，有時候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。

四、溫育

溫育是ELISA測定中影響測定成敗最為關(guān)鍵的一個因素。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時間。溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。最為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。溫育這一步是臨床ELISA測定中最容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時間為37℃ 30分鐘～1小時，進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1～2小時才能有較完全的結(jié)合，低于1小時，可能會影響測定下限。因此，關(guān)于溫育，在實際測定操作中一定要注意以下幾點：要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時間。一般來說，加完樣本和/或反應(yīng)試劑后，將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃，需要一定的時間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下，這段升溫時間可能還比較長，而在臨床實驗室中，很少有人注意這個問題，通常是將微孔板一放入溫箱即開始計時，這樣就很容易造成實際測定中溫育時間不夠，弱陽性樣本測不出來的問題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個問題，就是在每一年的冬季總有那么一個多月的時間，在做HBsAg測定的室內(nèi)質(zhì)控中，測定由衛(wèi)生部臨床檢驗中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽性樣本時，總是測不出來，不知原因為何？這可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān)，此時微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時間不夠，以致弱陽性樣本測定為陰性。因此，為保證37℃下足夠的溫育時間，臨床實驗室可自行確定本實驗室不同季節(jié)（不同室溫下）微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長時間孔內(nèi)溫度才能達(dá)到37℃，從而適當(dāng)延長板條在溫箱中的放置時間。具體的做法是，用一小溫度計放置板孔反應(yīng)溶液中測量觀察即可。

該公司產(chǎn)品分類：試劑血清細(xì)胞培養(yǎng)基 elisa試劑盒

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